[br] Nakanishi以10二甲基亚砜为冷冻保护剂,并采用双腔生物冷冻管缓慢降温(降温速率大约10CP分),-800e冰箱中保存气管长达3个月仍保持一定的活性。而超过6个月的标本气管结构严重破坏,移植后难以成活。因此,他认为使用双腔生物冷冻管,-800e冰箱保存气管的最长允许时间为3个月。[br] 保存温度高于-1300e会因细胞内重结晶导致细胞膜的破坏,而程控降温可以更有效的控制降温速度,因此Nakanish推测程控降温,液氮保存气管的时间应该更长。本实验合用二甲基亚砜和海藻糖作为冷冻保护剂,程控降温,液氮保存的气管在8个月时仍保持了完整的结构,与冷冻1小时相比活性仅有微小的变化。[br] 在另外的实验中,
抽沙管我们用该方法保存6周的气管经同种异体移植后完全成活,与自体移植组无明显差别。临床应用时当然希望有活性气管的保存时间越长越好,并且也需要明确这个最长的时限,因此这个期限将是我们下一步研究的课题。[br] 冷冻
速冻冷库前将气管标本在-40e冷冻保护剂中浸泡4小时,可以使冷冻保护剂充分浸润气管软骨,提高其存活率。我们在实验中也采用了Kawabe的方法。但冷冻保护剂均有一定的毒性,常温接触时间越长对细胞产生的毒害作用越大。在本实验中虽没有对此进行比较研究,但实验结果显示DTF组标本有相当的存活率,从而证明Kawabe的方法是有效和可行的。[br] DTF组标本在复温后虽然有相当的存活率,但还是有个别软骨细胞发生空泡变性。其原因究竟是是冷冻保护剂对细胞的毒性作用,还是冷冻保护剂没有完全渗透入所有软骨细胞,亦或是冷冻造成的损伤,有待进一步探讨。 [br] [br]